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子曾经曰过“知己知彼，百战不殆”，很多科研工作者对实验技能出神入化，但对所使用的试剂生产和应用知之甚少，导致买到不合适或假冒伪劣的产品，对时间和经费造成极大的损失浪费，所以选择合适的抗体，事半功倍。

一抗的选择

检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择，为缩小抗体的选择范围选中合适的抗体，需要考虑的因素：

1. 实验应用的类型

一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种分析类型，如：可以应用于WB /IHC /ICC /ELISA分析等，如果抗体说明书没有说明提及的应用类型，并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型，而仅是说明尚未经过此种分析试验验证。如果抗体不适用某些分析试验，会在抗体说明书上标注出来不适于某分析试验。

2. 样本蛋白的提取或处理

某些抗体要求样本经过某些特殊处理，例如：许多抗体只识别还原和变性的、表位已暴露不受二级四级结构阻碍的蛋白样本，另一方面，某些抗体只识别天然折叠的蛋白。当选择免疫组化的抗体时，应注意某些抗体只识别未固定的冷冻的组织，而另一些抗体则使用于无需抗原修复解交联步骤的甲醛固定石蜡包埋的组织，这些都会在抗体说明书上应用部分标示出来。

所以综上所述：

适用于IP（天然蛋白）的抗体不一定适用于WB（表位暴露）

适用于WB的不一定适用于IHC

适用于IHC-P（抗原修复）的不一定适用于IHC-Fr（不修复）

购买前，务必仔细阅读抗体说明书！

3. 样本的物种

一般来说，在使用偶联二抗结合无偶联物的一抗时，一抗宿主动物的物种选择比较重要，对与免疫组化而言，尽可能选择与样本不同种系物种的一抗，从而避免二抗与样本内源性免疫球蛋白产生交叉反应。一抗的来源主要有兔子和小鼠这两个物种，意思也就是，如果你的样本是兔子的，那就避免买兔来源的一抗；如果你的样本是小鼠的，那就避免买小鼠源的一抗。

4. 单克隆与多克隆

由一种克隆产生的特异性抗体叫做单克隆抗体，单克隆抗体能目标明确地与单一的特异抗原决定簇结合。同一个抗原决定簇在机体内也可以由好几种克隆来产生抗体，形成好几种单克隆抗体混杂物，称为多克隆抗体。

在抗原抗体反应中，一般单克隆抗体特异性强，但亲和力相对小，检测抗原灵敏度相对就低；而多克隆抗体特异性稍弱，但抗体的亲和力强，灵敏度高。

二抗的选择

二抗是在其它宿主体内制备的能与一抗或一抗片段结合的抗体，上通常连有酶或荧光素等标签。由于二抗所具备的优点使得其在免疫学实验中得以广泛应用，如WB/ELISA/IHC/IP等。二抗针对某一特定物种的所有抗体均具有特异性，因而使用特定标记的二抗可以免去对每一个一抗进行标记，大大节省了时间和费用；此外，一个一抗分子可以同时结合几个二抗分子，从而使信号大大增强，提高了实验灵敏度。

二抗，广义上是指专门和一抗进行特异性反应和结合的抗体。检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择，在选择二抗的时候要综合考虑一抗的类型及后继检测方案的要求，一般来说，选择合适的二抗需要从以下几个方面考虑：

1.一抗的种属来源

根据一抗的物种来源选择相应的抗该物种的二抗。例如：一抗是小鼠源的单克隆抗体，二抗则选抗小鼠的二抗（山羊抗小鼠或兔抗小鼠等）。

2.一抗的类别亚型

二抗需与一抗的类别或亚类相匹配。这通常是针对单克隆抗体而言。多克隆抗体主要是IgG类免疫球蛋白，因此相应的二抗就是抗IgG抗体。单克隆抗体的类别及亚型通常会在产品说明书中有描述，如果一抗是小鼠IgM，那么相应的二抗就应当是抗IgM。如果单克隆一抗是小鼠IgG的某一亚型（IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3），那么几乎所有的抗小鼠IgG都可以与之结合，或者你也可以选择专门针对这一亚型的二抗。此种抗体在双标记实验中尤其合适。

3.二抗的藕联标记

一般来讲，藕联到二抗上的探针主要有酶（辣根过氧化酶HRP）、荧光基团、生物素、金颗粒。选用哪种探针的二抗主要取决于具体的实验。WB和ELISA常用的二抗是酶标二抗，而免疫荧光实验中通常使用荧光基团标记的二抗，而金颗粒标记的二抗则更多的应用于免疫电镜中。

写在最后：抗体广泛应用于各种科研领域，且价格不菲。谨慎选择质量可靠，适用的抗体能够有效避免科研时间及成本的浪费，不要因为贪图便宜，选择了一些“平价替代”产品，其质量及售后，无法有效保证。

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